TIANSeq直接快速DNA文庫構建試劑盒（IIIumina）（NG101）
品牌：Watchmaker
貨號：NG101
規格：/品牌：Watchmaker
貨號：NG101
規格：/產(chǎn)品簡(jiǎn)介
TIANSeq DirectFast Library Kit(Illumina) 是專(zhuān)門(mén)針對于Illumina 高通量測序平臺所優(yōu)化的 DNA 文庫構建試劑盒。本試劑盒實(shí)現了 DNA 片段化、末端修復和 3’端 dA 尾添加在一管內一步法完成，同時(shí)所得產(chǎn)物無(wú)需純化，可直接用于 adapter 的連接。另外，本試劑盒配備的 PCR 擴增試劑經(jīng)過(guò)專(zhuān)門(mén)的優(yōu)化，擴增所得 DNA 序列產(chǎn)量高，保真度好、無(wú)堿基偏好性。本產(chǎn)品采用一步法的反應流程，省去了多步純化步驟，整個(gè)建庫流程僅需 2.5 hr；文庫轉化效率更高，可對微量 DNA 樣本進(jìn)行高效的文庫構建。
主要特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)
■ DNA 片段化過(guò)程和 PCR 富集過(guò)程無(wú)明顯堿基偏好性，測序均一度好。
■ 高文庫轉化效率， DNA 樣本起始量可低至 1 ng。
■ 一管式酶促反應，操作簡(jiǎn)便，省去多步純化步驟，整個(gè)建庫流程僅需 2.5 hr。
應用
適用于 Illumina 高通量測序平臺 DNA 文庫構建
文庫構建流程
實(shí)驗結果
靈活的上樣量和片段處理長(cháng)度
圖1. 不同反應時(shí)間對DNA 片段化效果
使用“TIANSeq DirectFast DNA Library Prep Kit” 對10 ng 和1000 ng DNA 進(jìn)行片段化處理。處理不同時(shí)長(cháng)的反應產(chǎn)物經(jīng)1.8× 磁珠進(jìn)行純化后用于A(yíng)ngilent 2100 分析。
片段化酶與機械片段化效果比較
圖2. 不同文庫制備方案基因組覆蓋的對比結果，三種不同GC 含量細菌基因組DNA 等摩爾混合，100 ng 混合DNA 經(jīng)不同方案制備文庫測序后比較基因組覆蓋度。結果表明：FEA Module（NG301) 對DNA 的片段化效果與超聲破碎高度一致，均不存在堿基偏好性。
樣本低至1ng建庫效果比較
圖3. 不同文庫制備方案基因組覆蓋的對比結果，三種不同GC 含量細菌基因組DNA 等摩爾混合，1 ng 混合DNA 經(jīng)不同方案制備文庫測序后比較基因組覆蓋度。結果表明：即使低至1 ng 的DNA 上樣量，FEA Module（NG301) 的片段化效果仍然與 超聲破碎方法高度一致，沒(méi)有堿基偏好性。
采用PCR free步驟測序結果比較
圖4. 不同初始量的基因組DNA 使用PCR 或PCR free 的方式進(jìn)行文庫構建，*終的基因組覆蓋對比對。結果表明：使用Fragmentation Module (NG301)試劑及一管式操作和高效的文庫構建步驟，無(wú)論是否進(jìn)行PCR 富集，所得到的DNA 文庫在片段覆蓋度分布方面均與機械破碎方法保持高度一致。
文庫構建效率與得率統計
圖5. 不同起始量樣本(1、10、25、50、100、500、1000 ng) 進(jìn)行文庫構建后，使用qPCR 對得到的文庫DNA 進(jìn)行定量分析結果。線(xiàn)性回歸分析表明在廣泛的上樣量范圍內，文庫得率均呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。即使在上樣量低至1 ng 的情況下，文庫構建效率也不會(huì )降低。
