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    IVD質(zhì)控品定量之數字PCR檢測
    來(lái)源: | 作者:沃小森 | 發(fā)布時(shí)間: 2024-08-15 | 542 次瀏覽 | 分享到:

        在體外診斷(IVD)行業(yè)中,涉及的各類(lèi)參考物質(zhì)如參考品、質(zhì)控品、質(zhì)控物、對照品、標準物質(zhì)、標準品、校準品、校準物等等,在產(chǎn)品研發(fā)、生產(chǎn)、使用、監管等過(guò)程中分別發(fā)揮不同的作用。這些參考物質(zhì)定值的準確性是至關(guān)重要的。
    qPCR定值
        分子診斷產(chǎn)品的參考物質(zhì)定值,通常是指對參考物質(zhì)中的核酸(DNA或RNA)拷貝數的測定。傳統方法,是用基于qPCR平臺的**定量,主要過(guò)程是合成含有待測靶標序列的質(zhì)粒,測定高濃度質(zhì)粒的質(zhì)量濃度后按照質(zhì)粒大小換算拷貝數,再以此高濃度質(zhì)粒為標準進(jìn)行梯度稀釋做qPCR 拷貝數和CT值對應的標準曲線(xiàn),后續待測樣本的CT值帶入標曲公式,可得出樣本的靶核酸拷貝數。這個(gè)方法的主要問(wèn)題在于
    1、質(zhì)粒質(zhì)量濃度檢測的準確性。常用的方法為Nanodrop為代表的分光光度計法,該方法特異性不夠,且較易受雜質(zhì)影響,在純度不好的情況下,結果偏差可能有5倍、甚至超10倍的偏差。做標曲用的質(zhì)粒濃度不對,后續的整個(gè)定量實(shí)驗都是不成立的了。
    2、qPCR的定量計算基于CT值換算,而CT值會(huì )受到很多因素影響:試劑擴增性能、引物探針設計、閾值線(xiàn)劃定、樣本中抑制物等等。

    數字PCR**定量
      當然如果上述問(wèn)題都可以盡量?jì)?yōu)化到*佳程度,qPCR的定量也是可以做到比較準確的。但是否有更好的方法,直接屏蔽這些問(wèn)題呢?那就是數字PCR!    自2008年**臺商業(yè)化數字PCR平臺問(wèn)世,數字PCR開(kāi)始正式走向廣大用戶(hù)。數字PCR技術(shù)是將含有核酸分子的反應體系分成成千上萬(wàn)個(gè)納升級的微滴,其中每個(gè)微滴或不含待檢核酸靶分子,或者含有一個(gè)至數個(gè)待檢核酸靶分子。經(jīng)PCR擴增后,對每個(gè)微滴進(jìn)行檢測,根據泊松分布原理及陽(yáng)性微滴的個(gè)數與比例即可得出靶分子的起始拷貝數或濃度。數字PCR是一個(gè)全新的**定量方式,與傳統定量PCR相比,其結果的精密度、準確性和靈敏度更佳,結果不依賴(lài)Ct值,直接給出靶序列濃度,實(shí)現真正意義上的**定量。

        全球數字PCR賽道,從2016年以后進(jìn)入活躍狀態(tài),目前國內外已發(fā)布幾十款產(chǎn)品。數字PCR*核心的技術(shù)是樣本的分割,根據分割方法主要可分為兩大派系,一是基于微孔板的芯片式分割,二是基于微流控技術(shù)的微滴生成式法?;谖⒖装宸ǚ指顣?huì )影響樣本均一性(微孔雖是大小均一,但是入孔的試劑體積無(wú)法**控制),進(jìn)而影響結果準確性。目前以油包水的微流控液滴生成技術(shù)為市場(chǎng)主流,但微流控芯片的微通道對表面光潔度、表面能、表面活性劑等要求很高,且國內沒(méi)有成熟配套的工業(yè)制造體系,使得整體成本還比較高。蘇州思納福采用的是一種全新的液滴生成方法——振動(dòng)注射技術(shù),通過(guò)毛細管加樣針插入到油面下,快速擺動(dòng)的同時(shí)均勻向外排出液體形成微滴,液滴大小僅由流速和震動(dòng)頻率決定,生成的微滴體積精度高且體積可控,液滴批間一致性良好。2022年3月思納福DQ24數字PCR率先進(jìn)入創(chuàng )新醫療器械特別審查程序,有望成為國內首批獲得三類(lèi)醫療器械注冊的數字PCR平臺。目前,IVD行業(yè)多家單位已使用Sniper設備進(jìn)行標準品的制備和檢測,Sniper產(chǎn)品和技術(shù)在IVD質(zhì)控品領(lǐng)域得到了充分的認可!


        總的來(lái)看,數字PCR的設備價(jià)格和使用成本仍相對較高,2023年以來(lái)后疫情時(shí)代的經(jīng)濟形式下,有預算采購這樣的儀器設備的企業(yè)明顯減少,而相關(guān)的定值需求仍然是大量存在的,外送技術(shù)服務(wù)成為一個(gè)更劃算的方案。杭州沃森生物于2021年開(kāi)始,基于思納福的DQ24全自動(dòng)數字PCR一體機,推出了數字PCR定量檢測技術(shù)服務(wù),目前已為數十家企業(yè)和科研單位客戶(hù)提供服務(wù)。


    杭州沃森生物數字PCR檢測服務(wù)服務(wù)周期短 :1.5-2h檢測時(shí)長(cháng)

    可多重檢測 : 6色熒光通道

    靈敏度高  :液滴有效率高、樣本有效利用率高

    **度高  :高效擴增試劑,提高樣本檢測**度

    試劑開(kāi)放 :兼容客戶(hù)試劑體系,可采用在研IVD產(chǎn)品qPCR試劑,直接對比杭州沃森作為蘇州思納福簽約代理商,數字PCR試劑耗材成本更可控,服務(wù)價(jià)格更具競爭力,歡迎來(lái)電咨詢(xún):0571-86495259!


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