說(shuō)到分子克隆或者載體構建

天空飄來(lái)六個(gè)字:

“分→切→接→轉→篩→表”

誰(shuí)的DNA動(dòng)了~

簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，分子克隆是指將一個(gè)特定的DNA片段（基因）插入到一個(gè)工程載體（如質(zhì)粒，噬菌體或病毒）中，形成重組DNA分子，并通過(guò)轉化、轉染或感染等方式將其導入宿主細胞并擴大培養，從而在體外實(shí)現目標DNA片段在宿主細胞（或無(wú)細胞復制體系）中的大量復制，用于后續實(shí)驗。分子克隆作為現代生物技術(shù)領(lǐng)域的一項核心技術(shù)之一，自1970年代誕生以來(lái)，已經(jīng)極大地推動(dòng)了生物學(xué)、醫學(xué)、農業(yè)等多個(gè)科學(xué)領(lǐng)域的進(jìn)步。

分子克隆流程示意圖

PCR、酶切、連接、轉化是傳統基因克隆方法獲得重組質(zhì)粒必不可少的步驟。但經(jīng)典分子克隆存在操作繁瑣、耗時(shí)長(cháng)、復雜片段構建難度大成功率低、酶切位點(diǎn)的選擇易受到限制等問(wèn)題，費時(shí)費力。

為了解決這些問(wèn)題，TIANGEN推出便捷、高效的分子克隆快速解決方案，搭配試劑和儀器，為科學(xué)工作者提供從制備模板-高保真擴增-電泳-膠回收-載體構建-轉化-篩選鑒定-質(zhì)粒提取-下游實(shí)驗的完整解決方案，助你又快又好地完成克隆實(shí)驗，GET理想的實(shí)驗數據。

TIANGEN分子克隆快速解決方案

1.高保真擴增

Ultra HiFidelity PCR KitⅡ（KP213）

模板普適性：能夠識別不同物種、30%～80% GC含量的DNA片段。
延伸力強：可擴增長(cháng)至20 kb的DNA片段。
高靈敏度：基因組模板用量可低至1 ng。
操作簡(jiǎn)便：只需加入模板和引物，輕松配好體系，PCR產(chǎn)物平末端，純化后可直接用于無(wú)縫克隆。

2.凝膠回收

瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒 (增強型)（DP219）

——室溫溶膠，快速高效完成膠回收

本試劑盒采用可以高效、專(zhuān)一結合DNA的硅基質(zhì)材料和獨特的緩沖液系統，從TAE或TBE瓊脂糖凝膠上回收DNA片段，同時(shí)除去蛋白質(zhì)、其它有機化合物、無(wú)機鹽離子及寡核苷酸引物等雜質(zhì)，回收100 bp-15 kb DNA片段，回收率高達80%，每個(gè)離心吸附柱每次可吸附的DNA量為10 μg。

快速：整個(gè)操作過(guò)程快速方便，十幾分鐘即可完成回收工作。

便捷：無(wú)需平衡液，室溫溶膠。

高效：獨特的離心柱和精心配制的緩沖液，保證*大量回收到高純度的目的DNA。

3.無(wú)縫克隆

EasyGeno單片段重組克隆試劑盒（VI202-02）

EasyGeno單片段重組克隆試劑盒基于DNA序列同源性進(jìn)行片段重組，可快速將單個(gè)片段定向克隆到任意線(xiàn)性化載體中。通過(guò)精心設計和嚴格試驗，本試劑盒含有的2×EasyGeno Single Assembly Mix具有的酶活性可將載體和片段的同源區域從雙鏈的3’端進(jìn)行重組連接，*終得到的無(wú)缺口閉環(huán)質(zhì)?？芍苯愚D化感受態(tài)細胞篩選克隆。該方案克服了酶切位點(diǎn)的限制，僅需在插入片段PCR引物5’端引入線(xiàn)性化載體的末端序列，使得插入片段5’和3’兩端帶有載體兩端的一致性序列（15-25 bp），即可實(shí)現插入片段的定向重組進(jìn)入載體。重組反應可在恒溫條件下快速進(jìn)行（50 ℃處理15 min），配合靈活的PCR產(chǎn)物處理方式和快速轉化方法，數小時(shí)內即可完成從DNA樣品準備到重組產(chǎn)物的轉化涂板培養的全部操作。

4.轉化培養

T-Fast感受態(tài)細胞（CB109）

——質(zhì)粒得率高、生長(cháng)速度快的感受態(tài)細胞

快速生長(cháng)：菌株生長(cháng)快速，涂布于瓊脂平板后 6 h 可見(jiàn)菌落， 8 h 可挑取單克隆菌落；過(guò)夜培養的單克隆菌落于 3 ml 液體LB培養基中培養 4h 即可用于質(zhì)粒提取。

快速轉化：適用于 Ampr 載體的 5 min 快速轉化流程。

高質(zhì)粒得率：相同 OD600 條件下，T-Fast 感受態(tài)細胞質(zhì)粒得率高于 DH5α 20%。

高陽(yáng)性率：攜帶lacIq 基因，可更嚴謹的控制Lac啟動(dòng)子的開(kāi)啟，從而提高籃白斑篩選的陽(yáng)性率。

5.菌落PCR

2×Taq PCR預混試劑Ⅱ(KT211)

——高效高抗逆性的快速 PCR 預混液

高擴增效率：高效擴增不同大?。ㄩL(cháng)達5kb）、不同來(lái)源的DNA片段。

高靈敏度：可從低至 10 pg 的基因組模板中擴增目的片段。

高抗逆性：對于粗提模板 / 菌液等雜質(zhì)含量高的模板也能輕松擴增目的片段，試劑反復凍融多次不影響擴增效果。

操作簡(jiǎn)便：只需加入模板和引物,輕松配好體系,特別適合大批量基因鑒定, PCR產(chǎn)物帶A,純化后可直接用T/A載體克

隆。

6.質(zhì)粒提取

快速質(zhì)粒小提試劑盒（DP105）

——先進(jìn)的堿裂解技術(shù)，8 min 獲得高質(zhì)量質(zhì)粒

快速：步驟少，操作簡(jiǎn)單，僅需 8 min。

高效：可提取菌體 85% 以上質(zhì)粒 DNA。

配備了獨特的 TIANRed 試劑，可以清晰辨明抽提過(guò)程中樣本的裂解程度，確保得到高效率、高純度的質(zhì)粒 DNA。

儀器設備

切膠儀

PCR儀

金屬浴

全自動(dòng)核酸提取儀

方案在手，實(shí)驗無(wú)憂(yōu)

分子克隆完整解決方案產(chǎn)品列表